Polysciences 24765-1試劑
更新時間:2024-08-14
Polysciences 24765-1試劑,細胞轉(zhuǎn)染在基因表達和蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域至關(guān)重要。Polysciences 24765-1,作為一種有效的轉(zhuǎn)染試劑,能夠高效地將DNA引入細胞內(nèi)。本文將詳細介紹Polysciences 24765-1的使用方法。
品牌 | 其他品牌 | 產(chǎn)地 | 進口 |
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加工定制 | 否 |
一、貼壁細胞轉(zhuǎn)染:Polysciences 24765-1試劑
以293T細胞為例,需要精確控制轉(zhuǎn)染條件以確保*高效率。以下是具體步驟:
細胞準備:
使用膠原酶處理細胞并計數(shù)。在6孔板中以每孔2×106細胞接種。每孔加入2 mL新鮮的DMEM/F12+5%FBS 培養(yǎng)基和1 mL的細胞懸液,置于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。24 h后,移除之前培養(yǎng)基,每孔加入2 mL新鮮的DMEM/F12+5%FBS。
轉(zhuǎn)染過程:
1.檢查細胞匯合度,達到70%-80%時開始轉(zhuǎn)染。
2.分別用兩份100 µL無血清培養(yǎng)基稀釋DNA,使DNA終濃度為1 µg/ml(DNA/總培養(yǎng)體積)和適當比例的適量Polysciences 24765-1。DNA:PEI 的比例要依據(jù)自己實驗摸索最適比例。
3.將稀釋的Polysciences 24765-1轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒(總體積200 µL)輕輕混勻,室溫孵育30 分鐘。
4.PEI-DNA 復(fù)合物滴加到細胞培養(yǎng)板每個孔中,輕搖混勻。注意輕輕沿著孔板邊緣滴入,以免破壞細胞的粘附性。
5.將培養(yǎng)板放入37℃,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)中培養(yǎng)24 h。
結(jié)果觀察:
在24小時后使用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效果,超過80%的293T 細胞在轉(zhuǎn)染后的24 h可以觀察到綠色熒光。
二、懸浮細胞轉(zhuǎn)染:Polysciences 24765-1試劑
懸浮細胞轉(zhuǎn)染步驟略有不同,小規(guī)模轉(zhuǎn)染時,用新鮮的培養(yǎng)基重懸浮,使細胞密度達到 1×106cells/mL,如需大規(guī)模轉(zhuǎn)染細胞密度要到達2-3×106cellsml/mL。
以293F細胞為例:
細胞準備:
傳代接種于20 mL 懸浮細胞生長培養(yǎng)基中(36.5℃,120 rpm,5%CO2 )培養(yǎng)細胞至1×106 cells/mL的密度,旋緊瓶口放入搖床,2~4 小時后可以進行轉(zhuǎn)染。
轉(zhuǎn)染過程:
1.用1 mL無血清培養(yǎng)基稀釋適量的DNA,使DNA 終濃度為1 µg/ml,混勻并靜置5 min。
2.用1 mLOptiPRO
SFM(無血清培養(yǎng)基)稀釋適當比例的PEI 40000,混勻并靜置10 min。
3.將稀釋的24765-1轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒輕輕混勻,室溫孵育30分鐘。
4.將PEI-DNA 轉(zhuǎn)染復(fù)合物逐滴加入到細胞培養(yǎng)液中,搖勻后旋緊瓶口放回搖床(36.5℃,5%CO2,120 rpm)。
5.基因表達可在24-72小時后檢測,時間取決于細胞系和轉(zhuǎn)基因。